维而勤生物

AAV 腺相关病毒

AAV 腺相关病毒包装服务,覆盖多种血清型,无致病性低免疫原性,基因治疗首选载体。

腺相关病毒包装

腺相关病毒(Adeno-associated virus,AAV)是一种对人类没有致病性的细小病毒(Parvovirus)。虽然 AAV 感染在人类中很常见,但与任何已知疾病无关,加上其转导分裂细胞和静止细胞的能力、非常低的免疫原性以及转基因长期表达(与野生型 AAV 病毒感染后整合到宿主细胞 DNA 不同,重组 AAV 载体主要作为染色体外游离体长期存在),这些特性使 AAV 成为炙手可热的用于基因治疗的病毒载体。

维而勤开发出一系列专有技术和试剂,从病毒滴度、纯度、活性以及一致性等方面显著提升了腺相关病毒包装工艺水平。

订购信息

AAV 包装服务订购目录(1 ml 规格对应大量制备,标准滴度 ≥1×10¹² VG/ml;小/中量规格见交付内容)

目录号产品信息规格滴度生产时间
H111干扰腺相关病毒(单个干扰病毒)1 ml≥1×10¹² VG/ml15 个工作日
H112干扰腺相关病毒套餐(3 个干扰病毒 + 1 个阴性对照)4×1 ml≥1×10¹² VG/ml20 个工作日
H113过表达腺相关病毒(基因 ≤2000 bp)1 ml≥1×10¹² VG/ml咨询
H114过表达腺相关病毒(基因 2000 bp 以上)1 ml≥1×10¹² VG/ml咨询
H115腺相关病毒阴性对照1 ml≥1×10¹² VG/ml10 个工作日
价格根据基因长度与载体系列询价立即询价

病毒血清型与组织嗜性

我们提供 18 种 AAV 血清型。注意:携带目的基因的转移质粒上的 ITR 序列来自 AAV2;包装不同血清型指的是使用不同血清型的衣壳蛋白表达质粒,与携带 AAV2 ITR 的转移质粒进行包装。

AAV1
平滑肌中枢神经系统视网膜内耳胰腺心脏
AAV2
平滑肌中枢神经系统视网膜内耳
AAV3
平滑肌
AAV4
中枢神经系统视网膜
AAV5
平滑肌中枢神经系统视网膜
AAV6
平滑肌心脏脂肪
AAV6.2
内耳
AAV7
平滑肌视网膜中枢神经系统
AAV8
平滑肌中枢神经系统视网膜内耳胰腺心脏脂肪
AAV9
平滑肌心脏胰腺中枢神经系统视网膜内耳睾丸
AAVrh10
平滑肌心脏胰腺中枢神经系统视网膜
AAV-DJ
心脏
AAV-DJ/8
AAV-PHP.eB
中枢神经系统
AAV-PHP.S
外周神经系统
AAV2-retro
脊神经
AAV2-QuadYF
内皮细胞
AAV2.7m8
视网膜内耳

交付内容

ssAAV(单链 AAV)制备服务分非纯化与纯化两种,按小/中/大量三种规格交付

项目非纯化 ssAAV 制备纯化 ssAAV 制备
定制病毒交付小量:≥2×10¹¹ VG/ml,10×25 μl 中量:≥2×10¹¹ VG/ml,10×100 μl 大量:≥2×10¹² VG/ml,10×100 μl小量:≥1×10¹³ VG/ml,4×25 μl 中量:≥1×10¹³ VG/ml,10×50 μl 大量:≥1×10¹³ VG/ml,10×100 μl
对照病毒小量:100 μl(赠送) 中/大量:2×100 μl(赠送)按定制病毒规格选购
病毒重悬液50 mM Tris 缓冲液(含 150 mM NaCl + 5 mM MgCl₂)pH 7.4 PBS 缓冲液(含 200 mM NaCl + 0.001% Pluronic F-68)
运输/存储干冰 / -80℃,避免反复冻融干冰 / -80℃,避免反复冻融
推荐应用体外培养细胞转导体外培养细胞转导、动物体内细胞转导

以上为参考交付范围,具体交付内容以双方确认的实验方案为准,详情请咨询技术支持。

对照病毒

选择原则:对照病毒与定制病毒的生物学应用相匹配。定制表达基因 → 对照用 EGFP;定制表达 shRNA → 对照用 Scramble shRNA。

对照病毒载体名称载体 ID适用定制病毒提供方式
EGFP 对照 AAVpAAV[Exp]-CMV>EGFP:WPREVB010000-9394npt过表达 / CRISPR / 非编码 RNA赠送
mCherry 对照 AAVpAAV[Exp]-CMV>mCherryVB151126-10021过表达(红色荧光替代)赠送
Scramble shRNA 对照 AAV(EGFP 荧光)pAAV[shRNA]-EGFP-U6>Scramble_shRNAVB010000-0023jzeshRNA 干扰赠送
Scramble shRNA 对照 AAV(mCherry 荧光)pAAV[shRNA]-CMV>mCherry-U6>Scramble_shRNAVB010000-0024wahshRNA 干扰赠送
Scramble miR30-shRNA 对照 AAV(EGFP 荧光)pAAV[miR30]-CMV>EGFP:Scramble_miR30-shRNA:WPREVB010000-9397wgwmiR30-shRNA 干扰赠送
Tet-On EGFP 对照 AAVpAAV[Tet_on]-TRE>EGFP-CBh>tTS:T2A:rtTAVB010000-0053bwTet-On 诱导表达选购
FLEX-EGFP 对照 AAVpAAV[FLEX_on]-CMV>rev(EGFP)VB180820-1044gcqFLEX 条件性表达选购

辅助病毒

辅助病毒与定制病毒的生物学应用相匹配。定制是仅含 TRE 的 Tet-On AAV → 需表达 rtTA 的辅助病毒才能诱导表达。

辅助病毒载体名称载体 ID适用定制病毒提供方式
SaCas9 AAVpAAV[Exp]-CMV>saCas9VB180125-1089ffa仅含 gRNA 的 AAV(CRISPR 编辑)选购
Cre AAVpAAV[Exp]-CMV>CreVB171024-1202yauFLEX 条件性表达选购

运输 / 储存

AAV 存储于 Tris 或 PBS 缓冲液中,干冰运输。AAV 比慢病毒更稳定,但仍请避免反复冻融。

🧊
运输方式
干冰运输
Tris 缓冲液(非纯化)或 PBS 缓冲液(纯化)包装,干冰运输送达
❄️
长期保存
-80℃
收到后立即放置于 -80℃,可保存约 1 年
❄️
中期保存
-20℃
若放置于 -20℃,可保存 2-3 周
💧
解冻后短期
4℃
融解后的 AAV 病毒可在 4℃ 保存 1-2 周

生产 / 质控

维而勤每批 AAV 出厂前均经过以下质控(anzhenbio 此项空白,我们补全):

无菌检测
方法:微生物培养法
标准:符合无菌要求
内毒素检测
方法:LAL 鲎试剂法
标准:纯化级 < 5 EU/ml
支原体检测
方法:PCR 法
标准:阴性
滴度测定
方法:qPCR 法(测基因组滴度 VG/ml)
标准:达标后交付
纯度检测
方法:SDS-PAGE 凝胶电泳
标准:无杂蛋白污染
空壳率检测
方法:TEM 透射电镜 / 分析超离心
标准:纯化级空壳率 < 30%

滴度保证

最大承载容量
4.7 kb
含 ITR,约野生型 AAV2 基因组长度。滴度保证仅适用于包装进病毒的区域(从 5′ ITR 到 3′ ITR)小于 4.7 kb 的载体;超出 4.7 kb 的部分在包入衣壳时会被剪切,导致包装出来的 AAV 颗粒含有不完整 genome,既影响 ITR qPCR 滴度检测,也影响转基因表达。
⚠️以下情形不保证滴度
  • AAV 血清型 2、3、4、6、6.2、2.7m8 的滴度通常偏低,对这些血清型保证其滴度为其它血清型最小滴度的 50%
  • 含毒性基因(促凋亡基因)
  • 破坏包装细胞或病毒完整性的基因(致细胞聚集的膜蛋白)
  • 易重排或形成二级结构的序列(重复序列、高 GC 含量)
  • 客户提供载体(无法控制质量)

交付周期

标准交付周期
10-20 个工作日
H115 阴性对照 10 个工作日 / H111 单干扰 15 个工作日 / H112 干扰套餐 20 个工作日;H113/H114 过表达需咨询(随基因长度浮动)。

客户提供载体

如需客户提供 AAV 病毒载体,请按外来物品接收指南寄送,严格按要求装运以免延误和损坏。

  • 按外来物品接收指南寄送载体
  • 严格按指南装运,避免延误和损坏
  • 所有客户提供材料均需经过 QC 检测
  • 每份材料附加检测费用
  • 客户提供物品接收并通过 QC 之后生产才正式开始
用户提供载体的滴度不在保证范围内(见滴度保证)。

技术专题:AAV 生殖系统基因递送图解

系列图卡(共 9 张):血清型选择、递送路径、细胞特异性启动子与关键注意事项。图卡文字较小,点击任意卡片可跳转完整图文解读(通栏大图,阅读更清晰)。

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本页内容为一般性介绍,实际交付物、规格与周期以双方确认的实验方案及合同为准,详情请咨询技术支持。