细胞凋亡（Annexin V/TUNEL）
细胞凋亡检测服务（Annexin V / TUNEL 法）。
细胞凋亡检测
细胞凋亡（Apoptosis）是程序性细胞死亡的主要形式，其检测对肿瘤治疗机制、神经退行性疾病、药物毒性评价、发育生物学研究至关重要。维而勤提供两套互补的凋亡检测体系：Annexin V-FITC/PI 双染法通过流式细胞术四象限分析，区分活细胞、早期凋亡、晚期凋亡与坏死，是凋亡定量检测的金标准；TUNEL 法通过末端脱氧核糖核苷酸转移酶（TdT）标记 DNA 断裂的 3′-OH 末端，适合在细胞涂片或组织切片上原位检测凋亡晚期的 DNA 片段化特征。
服务覆盖细胞培养、药物处理、凋亡诱导（含 Staurosporine / UV 阳性对照）、Annexin V/PI 染色、流式上机（≥ 1×10⁴ events/样本）、TUNEL 染色与荧光显微镜拍照、四象限比例统计与全套报告，支持流式与显微镜双平台检测，并可根据需求设置多个药物浓度与时间点。
检测方法对比
Annexin V-FITC/PI 双染
流式四象限定量，区分早凋/晚凋/坏死
- 原理：Annexin V 高亲和力结合外翻至膜外的磷脂酰丝氨酸（PS），PI 标记膜完整性受损的细胞
- 检测阶段：早期凋亡（Annexin V⁺/PI⁻）、晚期凋亡（Annexin V⁺/PI⁺）、坏死（Annexin V⁻/PI⁺）
- 优势：定量精确、通量高，适合药物诱导凋亡的剂量-效应与时程分析
- 平台：流式细胞仪
TUNEL 法
原位检测 DNA 断裂，定位凋亡细胞
- 原理：TdT 酶催化标记断裂 DNA 的 3′-OH 末端，标记凋亡晚期 DNA 片段化
- 检测阶段：凋亡晚期（DNA 断裂）
- 优势：可在细胞涂片或组织切片上原位定位凋亡细胞，保留形态学信息
- 平台：荧光显微镜 / 流式细胞仪
订购信息
支持 Annexin V/PI 双染、TUNEL 两种体系，可设多个药物浓度梯度与时间点。
| 目录号 | 服务项目 | 检测方法 | 检测平台 | 生产时间 |
|---|---|---|---|---|
| CX601 | Annexin V/PI 双染流式凋亡检测（单组单时间点） | Annexin V-FITC/PI 双染 | 流式细胞仪 | 5-7 个工作日 |
| CX602 | Annexin V/PI 多浓度/多时间点凋亡检测 | Annexin V-FITC/PI 双染 | 流式细胞仪 | 7-10 个工作日 |
| CX603 | TUNEL 法凋亡检测（细胞片/组织片） | TUNEL | 荧光显微镜 | 5-8 个工作日 |
| CX604 | 凋亡检测套餐（Annexin V + TUNEL 双重验证） | Annexin V/PI + TUNEL | 流式 + 显微镜 | 咨询 |
| CX605 | 凋亡诱导阳性对照（Staurosporine / UV） | Annexin V-FITC/PI 双染 | 流式细胞仪 | 3-5 个工作日 |
价格根据样本量、分组数与时间点询价立即询价 →
交付内容
交付流式原始数据、四象限比例统计与 TUNEL 染色图片，确保结果可追溯、可发表。
| 交付项目 | 内容说明 |
|---|---|
| 流式散点图 | FSC/SSC 设门图 + Annexin V/PI 四象限散点图（每样本） |
| 凋亡比例数据 | 早期凋亡 / 晚期凋亡 / 坏死 / 活细胞四象限比例统计表 |
| TUNEL 图片 | 荧光显微镜图片（TUNEL 阳性 + DAPI 复染，每样本 5 个视野） |
| 阳性/阴性对照 | Staurosporine / UV 诱导阳性对照与未处理阴性对照数据 |
| 实验报告 | PDF 报告（含实验流程、试剂信息、统计分析与结论） |
以上为参考交付范围，具体交付内容以双方确认的实验方案为准，详情请咨询技术支持。
质控标准
流式凋亡检测全流程质控：
✓细胞量
方法：细胞计数（上机前）
标准：每样本 ≥ 1×10⁵ - 1×10⁶ cells
✓上机采集量
方法：流式细胞仪事件数
标准：每样本 ≥ 1×10⁴ events
✓荧光补偿
方法：单染管补偿调节（FITC / PI）
标准：消除荧光串色，四象限分布清晰
✓设门策略
方法：FSC/SSC 圈门去除碎片与粘连细胞
标准：仅分析目标细胞群体
✓阳性对照
方法：Staurosporine（1 μM，6 h）或 UV 诱导
标准：阳性对照凋亡率 ≥ 30%
✓细胞活性
方法：处理前台盼蓝计数
标准：对照组细胞活性 ≥ 90%
技术参数
关键参数
≥ 1×10⁴ events / 样本
流式检测上机采集量 ≥ 1×10⁴ events，推荐每样本起始细胞量 1×10⁵ - 1×10⁶。Annexin V/PI 双染可在四象限内区分活细胞、早期凋亡、晚期凋亡与坏死；TUNEL 适合组织切片原位检测凋亡晚期 DNA 断裂。
⚠️以下情形可能影响结果
- •贴壁性差或易碎的细胞（如某些原代细胞、悬浮细胞）消化收集时可能影响早期凋亡比例
- •药物处理导致细胞严重碎裂或脱壁，可能丢失晚期凋亡/坏死细胞群体
- •客户提供的样本（细胞、组织）质量不达标或运输过程失活
- •TUNEL 检测中坏死细胞也可能呈阳性，需结合形态学判定
客户提供
委托维而勤前请按以下清单准备材料：
- ✓提供待测细胞株名称、来源、代次与培养条件（培养基、血清、特殊因子）
- ✓明确药物处理方案：药物名称、浓度梯度、处理时间与检测时间点
- ✓如客户自备药物，需提供溶解度、溶剂、储存条件与现配或储备液信息
- ✓明确检测方法偏好（Annexin V/PI 双染 / TUNEL / 两者结合）
- ✓如检测组织切片，需提供已固定（4% PFA）的样本或委托维而勤进行取材固定
- ✓提供所需分组与重复数（常规 3 复孔/组），以及阳性对照设置要求
Annexin V 染色对细胞膜完整性敏感，收集细胞时建议使用温和消化（EDTA 优于胰酶）并避免剧烈吹打；药物诱导时间过长导致细胞碎裂可能低估凋亡比例，建议设置多个时间点采样。
交付周期
标准交付周期
5-7 个工作日
从确认方案与收到合格细胞/药物次日起算；含多浓度梯度、多时间点或 TUNEL 组织切片的项目延长至 7-10 个工作日；客户自备样本需先做活性与质控评估，以合同为准。
本页内容为一般性介绍，实际交付物、规格与周期以双方确认的实验方案及合同为准，详情请咨询技术支持。