过表达细胞株
过表达细胞株构建服务，实现目的基因高水平表达。
过表达细胞株（OE）构建
过表达细胞株（Overexpression, OE）是将目的基因在强启动子（如 CMV、EF1a、CAG）驱动下导入宿主细胞并稳定整合至基因组，使其高水平表达目的蛋白的细胞系，常用于 gain-of-function 研究、功能基因验证、重组蛋白生产与信号通路激活研究，也是 KO 株的反向对照实验（KO + OE 回补）。
维而勤提供从载体设计、慢病毒包装或质粒转染、抗性筛选、单克隆化到表达验证的全流程过表达株构建服务。可选用 CMV（适合肿瘤细胞与贴壁细胞）、EF1a（适合干细胞、原代细胞、造血细胞）、CAG（适合免疫细胞、胚胎细胞）等多种强启动子，支持 Flag / Myc / HA / GFP / mCherry 等标签融合，配套 Western Blot（蛋白水平）与 qPCR（mRNA 水平）双重定量验证，可交付多克隆细胞池（Pool）与高表达单克隆（Monoclonal）两种形式。
启动子选择对比
CMV 启动子
广谱强启动子，默认推荐
- 适合大多数肿瘤细胞与贴壁细胞（HEK293、HeLa、A549 等）
- 表达强度高，是哺乳动物过表达载体的常用默认选择
- 注意：在部分干细胞、原代细胞中可能被沉默
EF1a 启动子
适合干细胞与原代细胞
- 适合干细胞、原代细胞、造血细胞等 CMV 易沉默的细胞类型
- 长片段基因表达更稳定
- 表达强度略低于 CMV，但持续性更好
CAG 启动子
强组成型，适合免疫细胞
- 适合免疫细胞、胚胎细胞等
- 由 CMV 早期增强子 + 鸡 β-actin 启动子 + 兔 β-globin 剪接供体组成
- 在多种细胞类型中表现稳定的高表达
订购信息
支持多种启动子（CMV / EF1a / CAG）、多种标签融合（Flag / Myc / HA / GFP）与两种交付形式。
| 目录号 | 服务项目 | 交付形式 | 验证方法 | 生产时间 |
|---|---|---|---|---|
| CX1001 | 过表达细胞株 Pool（多克隆混合池） | Pool | WB + qPCR | 6-8 周 |
| CX1002 | 过表达细胞株 Monoclonal（单克隆） | 2-3 株高表达单克隆 | WB + qPCR | 10-16 周 |
| CX1003 | 过表达载体构建（含标签） | 过表达载体 + 图谱 | 测序验证载体 | 2-3 周 |
| CX1004 | 过表达株鉴定（WB + qPCR） | — | WB + qPCR | 2-3 周 |
| CX1005 | GFP / 荧光标签过表达株 + FACS 分选 | 单克隆（FACS 分选） | WB + qPCR + FACS | 咨询 |
价格根据基因长度、启动子、标签与细胞类型询价立即询价 →
交付内容
交付高表达单克隆细胞株与定量验证报告，确保表达水平可量化、可重复。
| 交付项目 | 内容说明 |
|---|---|
| OE 细胞株 | 2-3 株高表达单克隆冻存管（≥ 1×10⁶ cells/vial） |
| 表达定量报告 | Western Blot（蛋白水平）+ qPCR（mRNA 水平）双重验证数据 |
| 过表达载体 | 过表达载体质粒（5 μg）+ 图谱 |
| 标签信息 | Flag / Myc / HA / GFP 等标签序列与抗体推荐 |
| 细胞冻存与说明 | 冻存管 + 培养说明 + 支原体检测报告 |
以上为参考交付范围，具体交付内容以双方确认的实验方案为准，详情请咨询技术支持。
质控标准
过表达株构建全流程质控：
✓载体构建
方法：全基因合成 + 酶切连接 / 同源重组
标准：测序验证序列 100% 正确
✓慢病毒滴度
方法：TCID50 / qPCR 法
标准：≥ 1×10⁸ TU/mL
✓感染效率
方法：MOI 1-100（依细胞类型优化）
标准：感染后 48-72 h 荧光阳性率 ≥ 70%（含 GFP 标签）
✓抗生素筛选
方法：Kill Curve 杀伤曲线（7-14 天）
标准：确定 7-10 天内杀死未感染细胞的最低浓度
✓表达验证
方法：Western Blot + qPCR
标准：目的蛋白 / mRNA 显著高于内源与空载对照
✓支原体检测
方法：PCR 法 / 荧光染色法
标准：阴性
服务保证
关键参数
交付 2-3 株高表达单克隆
常规项目交付 2-3 株经 Western Blot 与 qPCR 双重验证的高表达单克隆。启动子可选 CMV / EF1a / CAG，标签可选 Flag / Myc / HA / GFP / mCherry。导入方式默认慢病毒感染（兼顾感染效率与稳定整合），难感染细胞可定制电转或化学转染方案。
⚠️以下情形需注意
- •目的基因具有细胞毒性（如促凋亡基因、毒性膜蛋白），高表达致死导致稳转株难建
- •目的蛋白翻译后修饰或折叠异常，可能导致 WB 检测不到预期分子量条带
- •CMV 启动子在干细胞、原代细胞中可能被甲基化沉默，建议改用 EF1a
- •难感染细胞（如某些原代细胞、悬浮细胞）感染效率低，单克隆得率少
- •客户提供载体（无法控制质量与表达效率）
客户提供
委托维而勤前请按以下清单准备材料：
- ✓提供目的基因名称、物种、基因 ID（NCBI Gene ID / Ensembl ID）或基因序列
- ✓提供目的细胞株名称、来源、代次、培养基配方与培养条件
- ✓明确启动子偏好：CMV（默认）/ EF1a（干细胞/原代）/ CAG（免疫细胞）
- ✓明确标签需求：Flag / Myc / HA / GFP / mCherry（融合于 N 端或 C 端）
- ✓明确交付形式：Pool（周期短）或 Monoclonal 单克隆（周期长但表达均一）
- ✓明确验证要求：WB + qPCR（推荐）；如含荧光标签可加 FACS 分析阳性率
启动子选择应匹配细胞类型：肿瘤细胞/贴壁细胞优先 CMV，干细胞/原代细胞优先 EF1a，免疫细胞优先 CAG；促凋亡基因、毒性膜蛋白等高表达致死基因建议改用可诱导表达系统（如 Tet-On），避免稳转株建系失败。
交付周期
标准交付周期
Pool 6-8 周 / Monoclonal 10-16 周
从确认载体方案与收到合格细胞次日起算；难感染细胞、单克隆筛失败需重筛、基因序列较长或需基因全合成的项目可能延长；高峰期以合同为准。
本页内容为一般性介绍，实际交付物、规格与周期以双方确认的实验方案及合同为准，详情请咨询技术支持。