EMSA（凝胶迁移率实验）
EMSA 凝胶迁移率实验服务，研究转录因子与 DNA 序列的特异性结合。
EMSA 凝胶迁移率实验
凝胶迁移率实验（Electrophoretic Mobility Shift Assay，EMSA，又称凝胶阻滞实验 / Gel Shift）是研究 DNA 结合蛋白（转录因子、调控蛋白）与特定 DNA 序列相互作用的经典技术。其原理在于：蛋白与 DNA 结合形成复合物后，在非变性聚丙烯酰胺凝胶中的迁移速率慢于游离 DNA，凝胶上会出现滞后条带，从而在体外直观验证蛋白-DNA 结合的特异性与亲和力。
维而勤提供从探针设计与标记（生物素 3′ 末端标记，默认）/ 探针合成、核蛋白提取、结合反应、非变性凝胶电泳、转膜到化学发光成像的全流程 EMSA 服务，配套完整的阴性对照、冷竞争（100 倍未标记探针）与超迁移（特异性抗体）对照体系，结果特异性强、可重复、可发表。
订购信息
按探针-蛋白对计费，支持常规 EMSA、冷竞争验证、超迁移（抗体 Supershift）与突变探针对照等组合。
| 目录号 | 服务项目 | 探针标记 | 对照体系 | 交付时间 |
|---|---|---|---|---|
| CX1101 | EMSA 常规结合检测（单探针单蛋白） | 生物素标记 | 阴性对照 + 常规反应 | 10-15 个工作日 |
| CX1102 | EMSA 特异性验证（含冷竞争对照） | 生物素标记 | 阴性 + 常规 + 冷竞争（100×） | 12-15 个工作日 |
| CX1103 | EMSA 超迁移检测（Supershift） | 生物素标记 | 阴性 + 常规 + 冷竞争 + 抗体超迁移 | 咨询 |
| CX1104 | EMSA 突变探针对照（验证结合位点） | 生物素标记 | 野生型 + 突变型探针对照 | 咨询 |
| CX1105 | EMSA 同位素标记（γ-32P ATP 标记） | 同位素标记 | 按需求配置 | 咨询 |
价格根据探针数量、对照类型与标记方式询价立即询价 →
探针标记方式
生物素标记（默认推荐）
非同位素，安全通用
- 探针 3′ 末端生物素修饰，链霉亲和素-HRP 化学发光检测
- 无放射性，安全合规，灵敏度与同位素法相当
- 探针稳定性好，可长期保存，适合绝大多数 EMSA 场景
同位素标记（γ-32P）
灵敏度最高，需资质
- T4 多核苷酸激酶（PNK）催化 γ-32P ATP 标记探针 5′ 末端
- 灵敏度最高，适合低丰度或弱结合转录因子检测
- 需具备放射性同位素使用资质，操作与废液处理严格
交付内容
交付完整化学发光原图、灰度定量与全套对照数据，确保结果可追溯、可发表。
| 交付项目 | 内容说明 |
|---|---|
| 化学发光原图 | 未裁剪的膜发光图片（含游离探针带、结合带、超迁移带），含不同曝光时长 |
| 对照体系数据 | 阴性对照、常规反应、冷竞争（100× 未标记探针）、超迁移（抗体）完整对照带型 |
| 探针信息 | 探针序列、标记方式、修饰位置与浓度记录 |
| 灰度定量 | ImageJ 结合带 / 游离带灰度比值分析 |
| 实验报告 | PDF 报告（含核蛋白定量、结合反应体系、电泳条件与结论） |
以上为参考交付范围，具体交付内容以双方确认的实验方案为准，详情请咨询技术支持。
质控标准
EMSA 全流程质控确保条带特异、可重复：
✓核蛋白质量
方法：BCA 法定量 + SDS-PAGE 验证
标准：浓度 ≥ 5 μg/μl，无显著降解
✓凝胶条件
方法：4%-6% 非变性聚丙烯酰胺凝胶，0.5× TBE，4℃ 100V 预电泳 30-60 min
标准：条带锐利、复合物与游离探针分离清晰
✓非特异竞争
方法：Poly dI-dC（1-5 μg/反应）封闭非特异结合
标准：消除非特异条带，仅保留特异结合
✓结合缓冲液
方法：Tris-HCl / KCl / DTT / 甘油 / MgCl₂ / NP-40 体系
标准：蛋白活性保持，结合稳定
✓冷竞争验证
方法：100 倍过量未标记同源探针竞争
标准：特异结合带消失，证实结合特异性
技术参数
关键参数
4-6% native PAGE
EMSA 使用 4%-6% 非变性聚丙烯酰胺凝胶（0.5x TBE 缓冲液），4C 100V 恒压电泳，预电泳 30-60 min 以消除残余 AP。凝胶浓度与缓冲液条件影响蛋白-DNA 复合物的分离效果与条带锐度。
⚠️以下情形需注意
- •低丰度或弱结合转录因子可能信号弱，需增加核蛋白量或优化结合缓冲液
- •核蛋白提取后冻融导致活性下降，建议新鲜提取或分装保存
- •探针序列与结合位点不匹配导致无结合信号，建议先做序列验证
- •客户提供的抗体未经 EMSA/ChIP 级验证，超迁移可能无信号
样品要求与储存
核蛋白易降解、探针需避光，请严格按条件保存与运输。
🧊
核蛋白 / 细胞
干冰运输 / -80℃
核蛋白 ≥ 100 μg（浓度 ≥ 5 μg/μl），或对数生长期细胞 ≥ 1×10⁷ 个；干冰运输，-80℃ 保存 ≤ 3 个月，避免反复冻融。
❄️
探针 / 引物
-20℃ 避光
生物素标记探针干粉或溶液（≥ 10 μM），-20℃ 避光保存；提供探针序列与结合位点信息。
💧
特异性抗体
4℃ / -20℃
超迁移实验需提供 ChIP/EMSA 级特异性抗体（注明货号、物种反应性），冰袋运输。
客户提供
委托维而勤前请按以下清单准备材料：
- ✓提供目的蛋白信息：蛋白名称、基因 ID、物种来源与预期结合序列（如已知）
- ✓提供或委托维而勤设计合成探针：野生型序列、突变型序列（验证结合位点）与标记方式偏好
- ✓核蛋白可由维而勤提取，也可客户自备（提供浓度与提取方法说明）
- ✓如需超迁移实验，提供 ChIP/EMSA 级特异性抗体（注明货号、稀释比）
- ✓明确对照体系需求（阴性 / 冷竞争 / 超迁移 / 突变探针）
- ✓提供文献参考或预期结果（如有），便于实验方案确认
EMSA 成功的关键在于核蛋白活性与探针-蛋白亲和力；某些转录因子需新鲜提取核蛋白或优化结合缓冲液，可能需进行条件摸索（预实验），客户自备核蛋白的项目视样品质量评估是否一次出图成功。
交付周期
标准交付周期
10-15 个工作日
从确认探针序列与收到合格核蛋白/细胞次日起算；含突变探针对照、超迁移或条件摸索的项目可能延长至 15-20 个工作日；同位素标记项目需确认资质后排期，以合同为准。
本页内容为一般性介绍，实际交付物、规格与周期以双方确认的实验方案及合同为准，详情请咨询技术支持。