稳转细胞株构建
稳转细胞株构建服务，实现目的基因长期稳定表达。
稳转细胞株构建
稳定表达细胞株（Stable Cell Line）是通过将外源目的基因稳定整合至宿主细胞基因组、并经筛选与单克隆化获得的可长期稳定表达目的蛋白的细胞系，是重组蛋白生产、抗体药物开发、基因功能研究、药物筛选等领域的核心工具。
维而勤提供完整的稳转细胞株构建服务，主流方案为慢病毒感染-药物筛选法（兼顾高感染效率与稳定整合），同时支持化学转染、电转染等其他导入方式以适配不同细胞类型。服务涵盖表达载体设计、慢病毒包装、细胞感染、Kill Curve 杀伤曲线测定、抗生素筛选（Puromycin / G418 / Hygromycin）、单克隆化（有限稀释法）、稳定表达验证（WB / qPCR / FACS）与细胞库建立全流程，可交付多克隆细胞池（Pool）或单克隆细胞株（Monoclonal）两种形式。
订购信息
支持过表达、shRNA 干扰、CRISPR/Cas9 敲除、报告基因（GFP/Luciferase）等多种载体系列。
| 目录号 | 服务项目 | 交付形式 | 筛选标记 | 交付时间 |
|---|---|---|---|---|
| CS501 | 稳转细胞株构建（多克隆 Pool） | Pool（混合克隆） | Puromycin / G418 / Hygromycin | 4-8 周 |
| CS502 | 稳转细胞株构建（单克隆） | Monoclonal（单克隆） | Puromycin / G418 / Hygromycin | 8-16 周 |
| CS503 | 慢病毒包装 + 感染（含 Pool 筛选） | Pool | Puromycin | 4-6 周 |
| CS504 | 稳转株鉴定（WB + qPCR + FACS） | — | — | 2-3 周 |
| CS505 | Kill Curve 杀伤曲线测定 | — | 依抗生素 | 1-2 周 |
价格根据载体类型、细胞类型与交付形式询价立即询价 →
交付内容
交付冻存细胞株与完整鉴定报告，确保基因型正确、无污染、可稳定传代。
| 交付项目 | 内容说明 |
|---|---|
| 冻存细胞 | 2-3 支冻存管（≥ 1×10⁶ cells/vial），液氮干冰运输 |
| 鉴定报告 | 包含基因整合、表达验证、稳定性传代测试结果 |
| 表达验证（WB） | Western Blot 检测目的蛋白表达水平 |
| 表达验证（qPCR） | qPCR 检测 mRNA 转录水平 |
| 表达验证（FACS） | 流式细胞术分析阳性细胞比例（适合 GFP 等荧光标签） |
| 稳定性测试 | 连续传代 10-15 代后检测表达稳定性 |
以上为参考交付范围，具体交付内容以双方确认的实验方案为准，详情请咨询技术支持。
质控标准
稳转株构建全流程质控：
✓慢病毒滴度
方法：TCID50 / qPCR 法
标准：≥ 1×10⁸ TU/mL
✓感染效率
方法：MOI 1-100（依细胞类型优化）
标准：感染后 48-72 h 荧光阳性率 ≥ 70%
✓抗生素筛选浓度
方法：Kill Curve 杀伤曲线（7-14 天）
标准：确定 7-10 天内杀死未感染细胞的最低浓度
✓单克隆化
方法：有限稀释法（96 孔板单细胞接种）
标准：单克隆来源单一，无混合
✓支原体检测
方法：PCR 法 / 荧光染色法
标准：阴性
✓细胞身份鉴定
方法：STR 分型（人源细胞），匹配 ≥ 80%
标准：与 ATCC 数据库匹配
运输 / 储存
稳转细胞株的运输与传代注意事项：
🧊
冻存细胞株
液氮 / -80℃
干冰运输；液氮长期保存可稳定传代，-80℃ 短期保存 ≤ 1 个月。
❄️
复苏后细胞
37℃、5% CO₂
复苏后 24 h 内观察贴壁情况，72 h 后首次换液。
💧
筛选压力维持
—
建议传代时维持低浓度抗生素（如 1-2 μg/mL Puromycin）以保持表达稳定。
服务保证
最大承载容量
覆盖 100+ 种常用细胞株
包括 HEK293、HeLa、CHO、HepG2、A549、MDA-MB-231、RAW264.7、NIH/3T3、COS-7、BHK-21 等。难感染细胞（如原代细胞、神经元、干细胞）可定制方案，建议结合电转或高滴度慢病毒。
⚠️以下情形不保证滴度
- •客户提供载体（无法控制质量与表达效率）
- •目的基因具有细胞毒性（如促凋亡基因、毒性膜蛋白）
- •细胞本身难以感染或难以建立稳转株（如某些原代细胞、悬浮细胞）
- •需要特殊诱导表达系统（如 Tet-On / Tet-Off）的项目可能延长周期
客户提供
委托本司前请按以下清单准备材料：
- ✓提供目的基因序列、载体的图谱与抗性信息（如客户已有载体）
- ✓提供细胞株名称、来源、代次、培养基配方与培养条件
- ✓明确交付形式（Pool 或 Monoclonal）与筛选标记偏好
- ✓明确鉴定要求（需做哪些验证：WB / qPCR / FACS / STR）
- ✓如细胞为稀有或客户自有细胞株，需提前提供足够数量且无支原体污染
Kill Curve 杀伤曲线是稳转筛选的前提，强烈建议委托本司完成或提供同类细胞的抗生素耐受数据；客户自备载体的项目不纳入服务保证范围。
交付周期
标准交付周期
Pool 4-8 周 / Monoclonal 8-16 周
从确认载体方案与收到合格细胞次日起算；难感染细胞、Monoclonal 筛选失败需重复、或高峰期可能延长，以合同为准。
本页内容为一般性介绍，实际交付物、规格与周期以双方确认的实验方案及合同为准，详情请咨询技术支持。